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一般来说,实时PCR协议与标准PCR反应类似。在生产清洁模板、设计引物、优化反应条件等方面也有同样的问题。主要的区别是加入插层剂,如SYBR绿色或使用荧光引物检测PCR产物。在典型反应中,qPCR产物呈指数级生成。由于要使足够的产品易于检测,需要几个周期,荧光图与循环数图显示出乙状结肠的外观。在后期,反应底物逐渐枯竭,qPCR产物不再加倍,曲线开始平坦。荧光量开始迅速增加的曲线上的点,通常是基线上方的一些标准偏差。Ct与模板的曲线呈线性关系,因此,通过比较多个反应之间的Ct值,可以计算目标核酸的浓度。
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