Promocell培养基的配制与准备:
1.成分添加准确性
按照产品说明书精确称量和添加各种成分。例如,对于干粉培养基,要确保每种成分如氨基酸、维生素、无机盐等都准确无误地加入。
注意添加顺序,一般先加入基础培养基成分,再添加血清、生长因子等添加剂。因为血清中含有多种蛋白和因子,如果添加顺序错误,可能会引起蛋白沉淀等问题。
2.溶解和混合均匀
将称量好的成分加入到适量的溶剂(通常是蒸馏水或去离子水)中。对于含有难溶成分的培养基,可能需要加热或搅拌辅助溶解。
采用适当的搅拌方式,如磁力搅拌或机械搅拌,确保培养基成分完*混合均匀。不均匀的培养基可能导致细胞在不同位置接受的营养和环境条件不一致,影响细胞生长和实验结果。
3.过滤除菌
配制好的培养基必须进行过滤除菌,通常使用0.22μm的滤膜。这是为了保证培养基中没有细菌、真菌等微生物污染,为细胞提供一个无菌的生长环境。
过滤时要确保滤膜的完整性,防止滤膜破损导致除菌失败。可以采用真空过滤装置或正压过滤装置,并且要注意过滤装置的无菌操作,避免二次污染。
Promocell培养基的储存和使用:
1.储存条件
未使用的培养基应储存在2-8℃的冰箱中,避免冷冻,因为冷冻可能会破坏培养基中的一些成分,如血清中的蛋白等。
注意避光保存,特别是含有光敏感成分的培养基。有些成分在光照下可能会发生分解或变性,影响培养基的质量。
2.预热
在使用前,应将培养基预热到37℃左右,这是因为细胞培养通常在37℃的恒温环境下进行。可以将培养基放置在水浴锅中预热,但要注意防止水浴锅的水进入培养基造成污染。
3.使用时效
配制好的培养基一般有一定的使用期限。例如,添加了血清的培养基在4℃下保存不宜超过一个月,最好在两周内使用。因为随着时间的推移,培养基中的营养成分会逐渐降解,血清中的活性成分也会失活,而且长时间保存会增加微生物污染的风险。
4.细胞接种密度
在接种细胞时,要根据细胞类型和实验目的控制合适的接种密度。如果接种密度过高,细胞会因为营养物质竞争和空间限制而生长不良;接种密度过低,则可能无法达到实验所需的细胞数量。例如,对于贴壁细胞,一般每平方厘米接种1-10?个细胞比较合适,但具体数值因细胞种类而异。
